• eliza yani anti hiv testinin pozitif çıkması sonucu, hiv'in vücudunuzda gerçekten enfekte olup olmadığının doğrulanaması için yapılan testin adı. bu testin sonucu kesindir.

    istatisliklere göre eliza testinde pozitif çıkan kişilerin % 20'si westernblood testinde negatif çıkabilmektedir.

    (bkz: eliza testi/@mimiko)
  • (bkz: western blotting)
  • http://en.wikipedia.org/wiki/western_blot
  • çiçeği burnunda yazar ve iki teker çaylağı...
    ama ben inanıyorum ki kotaracak bu işi de..
  • manet avcısı.
  • aynı zamanda şehirde ondan hızlı manet tedarikçisi bulunmadığı söylenir.
  • western blot ile :

    1- hiv virüsünün doğrulaması

    2- borrelia burgdorferi doğrulaması yapılır.
  • hiv doğrulamasında altın oran olarak nitelendirilen bu testin yanılma olasılığı var mıdır acaba? dünyada bu testin hatalı sonuç verdiği bir durum olmuş mudur acaba!?!?
  • yaparken bel fıtığı olacağınız test. tam bir gün sürer: eşit yükseklikten aynı anda bırakılan birkaç tane protein kokteyli, bir süre sonra (15-30 voltta bir saat falan) düşmeye devam eder, tabii siz de bu esnada bakarsanız daha hafif olanın daha iyi aşağı indiği bir görüntüyle karşılaşırsınız.

    hazırlanma safhası pek bi zahmetlidir: iki tüp jel hazırlamanız gerekir, bu jeller, içerisinde ancak mikroskopla görebileceğiniz boşluklar oluşsun diye hazırlanır. bu boşluklar, yukarıdan bırakacağımız proteinlerden ağır olanlar daha zor aşağı insin de, bir elek misali bu proteinleri ağırlıklarına göre sıralayalım diye var.

    sonra bu jelleri bir mekanizmanın içerisine, mekanizmanın plastik duvarıyla aralarında yarımşar milimetrelik boşluk kalacak şekilde döküyoruz: bayağı çimento kalıp gibi, ama 10 santimetrelik uzunluğa ve yarım milim genişliğe sahip olacak bi kalıp bu. sonunda şöyle bir görüntü oluşacak

    (bu jellerin nasıl hazırlandığına falan girmiyorum, orası uzun; zaten kimse de ezberlemenizi istemez, lab duvarında liste vardır, bakıp oradan hazırlarsınız.)

    şimdi artık, elimizde bir sürü küçük yükleme boşluğu (proteinleri bu tüpçüklerin yukarısından akıtıyoruz, yükleme noktaları da burası oluyor yani.) oluşan, yan yana tüp misali dizilmiş bir mekanizmamız var. bu mekanizmaya bütün örnekleri tek tek yüklüyoruz; ancak çok dikkat edin, çünkü bu mekanizma, milimetrik farklarla hedefi ıskalayabileceğiniz bir jel olduğu için, genelde bu aşamada çok hata yapılır: eller kayar, titrer, proteini damlatmak için kullanılan pipete azıcık hızlı basarsınız, falan filan... yani biraz can sıkıcıdır. iyice eğilip yaklaşmanız lazım, bel fıtığı kısmı da burada başlıyor zaten*

    artık yüklemeleri yaptıktan sonra, bu mekanizmayı önceki aşamalarda bir miktar sıvının olduğu bir kaba koymuş oluyorsunuz. bu sıvı, elektrik alanın proteinleri dibe çekmesini kolaylaştıran şey. bu olmasa o proteinlerin aşağı inmesi yıllar alır. her neyse, bu sıvıyı vs. de hallettikten sonra, şehir cereyanını açıp bir saat bekliyorsunuz.

    şimdi o zaman prensip şu, aşağı inen proteinler, ağırlıklarına göre, üstlü altlı sıraya dizilmeli. yani üç tane kokteylim var diyelim: bunların her birini boşluk 1, 2 ve 3'e koymuş olursam, boşluk birde ağırlığına göre çeşitli yüksekliklerde sıralanmış (atıyorum) a, b, c ve d proteinleri göreceksiniz. yine diğer kokteyllerde de ağırlıklarına göre dizilmiş proteinleri görünce, hah tamam diyip bu elektrik aşamasını geçeceksiniz.

    şimdi bu elektrik mevzuu da ayrıntılı, hatta iki farklı biçimde akımı veriyorsunuz: biri üst kısımdaki jelin en altında bu proteinleri aynı sırada dizmek için, diğeri de bunları ağırlığına göre sıralamak için; ama zaten bu kadarını prensibiyle vs. anlatmaya lüzum yok.

    gel gelelim işleyişe: genelde en sağdaki kapile (minik boşluk) ağırlığını tam olarak bildiğiniz, farklı renkte işaretleyicilerle belirtilmiş birkaç proteinin oluşturduğu karışımı yüklersiniz. tabii bu kokteyldeki proteinler de tıpkı diğerleri gibi o süre zarfında ağırlığına göre aşağı ineceğinden, en sağdaki kapilin içinde artık hangi ağırlıktaki proteinin ne kadar aşağı inmiş olduğunu gördüğünüz bir cetvel yaratmış olursunuz.

    sonra soldaki her bir kapile bakarak burada birazdan miktarını ölçmek istediğiniz (örnek vereyim 30 kilodalton ağırlığında) protein hangisiyse, onun sağ tarafta denk gelen alçalma miktarına bakar, ona göre o yükseklikteki yoğunlaşmış çizgiyi baz alırsınız.

    peki şimdi ne yapacağız? sıra, bütün bu kapillerin (jel içerisinde sıralanmış) mevzubahis proteinlerini, artık kalıcı bir şekilde o pozisyonlarına sabitlemek. fotoğraflarını çekiyorsunuz aslında: jeli alıp, artık yönteminiz hangisiyse onun izin verdiği şartlara göre bir emdirme yöntemi belirleyerek, mevcut durumda sıralanmış proteinleri bir kağıda sabitlemeye, geçirmeye çalışacaksınız.

    sonrası kolay, bu kağıtla jellerin temasının kesilmediği bir ortam hazırlayıp bunları gece boyu dinlenmeye koyuyorsunuz. ertesi günün sabahı bu emdirilmiş kağıtları alıp, foton sayıcı özel bir fotoğraf makinesiyle, o ölçmek istediğiniz, belirli seviyede durdurmuş olduğunuz protein hangisiyse onun yoğunlaştığı çizgiyi fotoğraflıyorsunuz. makine bu çizginin yoğunluğunu hesaplayıp size aslında yarı kantitatif bir değer sağlamış oluyor: yani evet, diğer tüplerdeki proteinlerden az ya da çok olup olmadığını söyleyebilirsiniz ama; kalkıp da burada şu kadar gram protein var diyemezsiniz.

    günün sonunda, bu değerleri kullanarak mevcut örnekteki proteinin karşılaştırmalı bir miktarını belirlemiş olursunuz. deneyin bir basamağında bile yapacağınız hata, bütün emeğinizi mahveder; ancak neyse ki bayağı ucuz bir testtir, çok defa tekrarlanabilir.

    southern, northern falan hepsi aynı esasa dayanır: küçük olan engelleri çabuk atlar. ağırlığı şu kadar olanın bu parkurda ne kadar yol gittiğini biliyorsam, parkurun o noktasında göreceğim her çizgi, o ağırlıktaki protein/dna/rna örneğinin bizzat kendisi olacaktır. o zaman ben de buradaki yoğunlaşmayı sayar, farklı tüplerdeki örnekleri birbiriyle karşılaştırarak aralarındaki farkı saptayabilirim. hepsi bu kadar, temelde bayağı basit bir şey yani.

    ha, ben yorulmak istemiyorum diyorsanız, elisa kiti kullanarak ölçeceğiniz proteinin direkt miktarını bile 3-4 saatte saptayabilirsiniz. ama o 500 dolar, onun da öyle bi sıkıntısı var*
  • (bkz: eastern blot)*
hesabın var mı? giriş yap