immunoprecipitation

• bagisiklik sisteminin bir parcasi olan antikor-antijen iliskisinin alinip verimli bir yontem haline getirilmesidir.
  
  genelde su sekilde olur: herhangi bir antijene karsi antikor (antibody) organizmanin birinde uretilir --sican, fare, tavsan, lama, keci, esek artik hayalgucunuze kalmis. bu antibody, antijeni cokertmek istediginiz ortama eklenir. su asamada bunlarin hepsi cozeltinin icindeler ve bunlari cokertmek sozkonusu degil. burada yardima bakteriyel bir kisim proteinler yetisiyor, ornegin protein a ve protein g. bu proteinler, normalde, antibodylere yapisarak onlari etkisiz hale getiriyor; immunoprecipitation'da ise beadlerin (cok kucuk parcaciklar) (agarose olur, sepharose olur, superparamagnetik olur) uzerine kovalent olarak baglanip bu yapiskan proteinlerden kati bir yuzey olusturuluyor ve bu parcaciklar santrifuj veya miknatislarla kolayca toplanabiliyor. bu sekilde sizin antijeniniz dogal ortaminda istedigi protein vs. ile iletisim icinde oluyor, sizin antikorununz bu antijene yapisiyor, protein a sizin antikorunuza baglaniyor, ve son olarak protein a'nin oldugu kati parcaciklari cozeltideki diger her seyden ayiriyorsunuz. oldu mu size immunoprecipitation?
• ben bu yöntemi yaparken alabildiğine doğal çözeltiler kullanırım. hücre kültüründe eksprese edilen bir proteini çalışıyrsam şayet, hücre kültürü flask'ından hücreleri tripsin ile çıkarmam mesela, scraper (sıyırıcı) kullanırım. çözeltileri çok iyi pipetlerim. deneyin içeriğine göre inkübasyon sürelerini değiştiririm. en etkin bağlanmanın + 4 derece santigradda olduğunu hatırlatmayı borç bilirim.
  
  eğer bu deney sonunda jel elektroforezinde görüntülediğiniz bantı mass spectrometry'ye (kütle spektrometrisi) analiz için gönderecekseniz, keratin kontaminasyonuna dikkat etmeniz gerekir. tüm aşamaları alkolle yıkanmış materyaller, otoklavlı çözeltiler ve bir çeker ocak içinde, dirseğinize kadar steril eldivenler giyecek şekilde hatta saçınıza da bir bone takacak şekilde yapmalısınız.